¿Cómo elegir los tubos de PCR adecuados?
Respuesta: Los tubos de PCR BKMAM son adecuados para los instrumentos de PCR convencionales y los instrumentos de PCR en tiempo real del mercado (instrumentos de PCR BD, Beckman y Wanshi).
Comparación de PCR cuantitativa en tiempo real, PCR digital y PCR tradicional:
Descripción general de la PCR digital: mida la proporción de réplicas negativas para determinar el número absoluto de copias.
Descripción general de la PCR en tiempo real: las mediciones se realizan a medida que se produce la amplificación de la PCR.
Descripción general de la PCR tradicional: mida la cantidad de producto de PCR acumulado al final del ciclo de PCR.
¿La PCR digital es cuantitativa?
R: Sí, la proporción de respuestas RCR negativas se ajusta al algoritmo estadístico de Poisson.
¿La PCR en tiempo real es cuantitativa?
R: Sí, porque los datos se recopilan durante la fase exponencial (logarítmica) de la PCR, durante la cual la cantidad de producto de PCR es proporcional a la cantidad de plantilla de ácido nucleico.
¿La PCR tradicional es cuantitativa?
R: No, pero comparar la intensidad de la banda amplificada en el gel con un estándar de concentración conocida puede brindarle un resultado "semicuantitativo".
Aplicaciones de PCR digital: cuantificación absoluta de carga viral, cuantificación absoluta de estándares de ácido nucleico, cuantificación absoluta de bibliotecas de secuenciación de última generación, detección de alelos raros, cuantificación absoluta de expresión génica, enriquecimiento y separación de mezclas
Aplicaciones de la PCR en tiempo real: cuantificación de la expresión génica, validación de micromatrices, control de calidad y validación de ensayos, detección de patógenos
, genotipado de SNP, variación del número de copias, análisis de microARN, cuantificación de virus, experimentos de siARN/ARNi
Aplicaciones de la PCR tradicional: amplificación de ADN, secuenciación, genotipado, clonación molecular
Conclusión: ventajas de la PCR digital: no es necesario depender de referencias o estándares, la precisión deseada se puede lograr aumentando el número total de réplicas de PCR, alta tolerancia a los inhibidores, capacidad para analizar mezclas complejas
A diferencia de la qPCR tradicional, la PCR digital responde linealmente a la cantidad de copias que emergen y se pueden detectar pequeñas diferencias de cambio de pliegue.
Ventajas de la PCR en tiempo real: mayor rango dinámico de detección, no se requiere procesamiento posterior a la PCR, detección capaz de cubrir cambios tan bajos como 2- veces, adquisición de datos durante la fase exponencial de la PCR, aumento de la señal de fluorescencia del indicador con los amplicones resultantes Proporcionales en número, las sondas de división proporcionan un registro permanente de la división de los amplicones
Desventajas de la PCR tradicional: baja precisión, baja sensibilidad, rango dinámico pequeño < 2 logs, baja resolución, no automatización, solo análisis diferencial basado en especificaciones, resultados no representados como números, cuantificación insuficiente usando tinción con bromuro de etidio, Post-PCR
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